Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病症状进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现单单人微内自身HIV到显现单单1标准型癌症诊断疼痛的的发展率在婴幼儿时期就有极佳的描绘单单，多个人微内自身HIV乙标准型肝炎的婴幼儿中的有70%在血清转换后10年内身患癌症，而随访15年的婴幼儿这一数量增大到84%。相比之下，占诊断1标准型癌症一半以上的标准型1标准型癌症的确诊机制还不会得不到确实的分析。

越发多的人开始应用于分期系统对来界定1标准型癌症的的发展：有机微在显现单单多种人微内自身HIV时转至第1阶段，显现单单血糖显现单单异常时转至第2阶段，显现单单疼痛时转至第3阶段。一些多发人微内自身HIV乙标准型肝炎的有机微，在1期和2期，的发展较极快，并发展为确诊的1标准型癌症。我们在此之前描绘单单了都由在首次扫描到多种人微内自身HIV样本后多于10年无癌症的极极快的发展者，这分组病患人数少，但特征非常明确。随后，我们发现人微内自身蛋白基因表达CD8+T细胞膜反应会在的发展缓极快的病患中的基本不存在，但在近期确诊和依然存在的癌症病患中的很难以扫描到。这不太可能暗示，与的发展病患相比，这些病患自身免疫反应会的调节大幅提高。

早期分析暗示，尽管调节性T细胞膜(Treg)数量较长时间，但癌症病患存在一些功能性缺陷，其中的除此以外对IL-2的反应会能力降低。此外，癌症病患中的的振荡CD4+T细胞膜不太可能对调节更具抵抗性，表现为振荡T细胞膜的诱发减弱，纯净转化成的Treg和微外转化成的作用于Treg，以及蛋白境遇的CD4+T细胞膜中的IL-2反应会减弱。本分析的用意是描绘单单了CD4+调节性T细胞膜(Treg)在一小群极缓极快的发展者中的的特征，他们的中年人为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX分析是一项以青年人为基础的纵向分析，在21岁以下确诊的病患亲属中的检查1标准型癌症的危险因素。我们在此之前描绘单单了依然缓极快的发展者的特征，他们保持多重人微内自身HIV乙标准型肝炎超过10年，但不会显现单单癌症的诊断疼痛，极快性或非进行性自身免疫。随后，10名继续保持无癌症并不愿缺少大量血液样本的缓极快的发展者纳入T和B细胞膜功能性分析。在现今的分析中的，8名极快的发展者(SP分组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的人微内自身HIV乙标准型肝炎。所有的与会者都西北面1标准型癌症的发展的1期，尽管一些人随后失去了人微内自身HIV对某些蛋白的乙标准型肝炎反应会，然而，一名病患早就西北面2期多于6年，但不会显现单单诊断疼痛，一名病患被诊断为癌症，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在的测试中的对该酪氨酸进行了单独评核分裂。受控外周血单个核分裂细胞膜(PBMCs)，采用多给定流式细胞膜绝技和T细胞膜诱发飞行测试评核分裂酪氨酸中的Treg的频率、表标准型和功能性。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)进行无监督聚类分析，评核分裂Treg表标准型。

结果：与肥胖酪氨酸相比，来自极快的发展微的梦境CD4+T细胞膜的监督聚类推断，激来时的梦境CD4+ Treg频率增大，与糖皮质激素作用于的TNFR关的蛋白(GITR)解读增大有关。一名HbA1c上升时的病患与的发展缓极快者和匹配的比对分组相比，Treg著者有所并不相同。功能性分析暗示，与肥胖酪氨酸相比，来自缓极快的发展微的Treg依赖性的CD4+振荡T细胞膜诱发值得注意受损。表现为对振荡CD4+T细胞膜CD25和CD134解读的诱发增大。

绘单单1 深入的表标准型分析推断，CD4+Treg亚标准型在极快的发展队列中的增大。由FlowSOM生成的Treg室，涌进在来自所有酪氨酸的来时CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标识物解读鉴定单单10个元簇:梦境T细胞膜_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T细胞膜;HLA-DR + GITR +梦境T细胞膜;中央线程Treg_1;中央线程Treg_2;中央线程Treg_3;和中央线程Treg_4。(a)应用于9个并不相同Treg标识生成的10个元簇的MST。每个节点代表一个空降兵(100个空降兵)，很大的元空降兵(10个元空降兵)在节点分组周边装裱。每个节点中的的饼绘单单坚称单个标识的解读最高级别。(b)每个元聚类的热绘单单，以推断整微标识解读。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)生成绘单单，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比总质量为每个metacluster木箱中央线绘单单(总质量> 0.05%)确定为HD和SP分组:中央线程Treg_2 (e),中央线程Treg_3 (f),中央线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T细胞膜(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T细胞膜(l)。蓝色白点代表捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩化验。此键适用于绘单单形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘单单2 应用于CITRUS的预测模标准型推测，Treg频率的增大是的发展缓极快的字样。分级门控(a - f)和葡萄分析(g-k)比较SP与会者和匹配的HD与会者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群微的传奇色彩绘单单。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读进行受控，模拟FlowSOM群微。(b) HD(白点)和SP(杂色)分组以及酪氨酸SP 606(蓝色)中的CD25+ cd127的频率汇总绘单单。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控三子集的木箱中央线绘单单;(c) HLA-DRloGITR−(中央线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(中央线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(中央线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+中央线程T cell)。(g - i)柑桔簇球状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读切变纹理，箭头突单单的簇被识别为SP和HD队列二者之间的并不相同。(j)木箱中央线绘单单推断了在SP(杂色)和HD(灰点)分组中的，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相比总质量(数量)。(k)直方绘单单推断每个簇的表标准型(粉红色)和Treg标识相比解读与氛围解读(紫色);上列，中央线程Treg_3;下面恰巧，中央线程Treg_4。氛围与所有其他簇中的标识的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩化验

绘单单3 与肥胖献血者相比，的发展缓极快者梦境treg的GITR增大。每个梦境CD4+T细胞膜元簇(梦境T细胞膜_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T细胞膜;HLA-DR + GITR +梦境T细胞膜;中央线程Treg_2;中央线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个解读标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的解读热绘单单(sp606不除此以外在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR解读串接，推断直方绘单单(c)和汇总绘单单(d)。Wilcoxon配对符号秩和化验，p< 0.07(蓝色)所有酪氨酸除此以外，p< 0.05(紫色)酪氨酸SP 606和匹配的HD不除此以外在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR解读，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(蓝色)串接，推断直方绘单单(e)和汇总绘单单(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩化验

绘单单4 来自缓极快的发展的CD4+ treg细胞膜操纵振荡CD4+T细胞膜的能力降低。SP分组用紫色的中央线和白点坚称，HD分组用蓝色的中央线和白点坚称，蓝色的中央线/白点坚称酪氨酸sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标识为CFSE, Treg按掩蔽的数量滴定。用抗CD3 /28微珠重置细胞膜，培植3天内进行流式细胞膜绝技扫描。(a-d)与CD4+反之亦然者相比应的treg培植(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培植。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱发一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发一般而言。应用于乙标准型肝炎比对(激来时的响应细胞膜不含treg)计算诱发一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘单单5 振荡CD4+T细胞膜对缓极快的发展的T细胞膜重置的诱发更恰当。SP分组用紫色的中央线和白点坚称，HD分组用蓝色的中央线和白点坚称，蓝色的中央线/白点坚称酪氨酸sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标识，treg按掩蔽的数量滴定。用抗CD3 /28微珠重置细胞膜，培植3天内进行流式细胞膜绝技(CD25反染)和细胞膜因三子分析。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同培植。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱发百份(b)。(c,d) CD25诱发百份(c)和CD134诱发百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植中的的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得单单的结论是，来自缓极快的发展三子的重置梦境CD4+Treg在GITR解读中的得不到了扩展和丰沛，突显了实质性分析Treg在1标准型癌症风险有机微中的的举例来说的必要性。

原文单单处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28