Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型白血病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显露现胰脏自身抗棒状到显露现1改型癌症外科疼痛的困难重重率在学龄前时期就有很好的详细描述，多个胰脏自身抗棒状白血病的学龄前里面有70%在血清转换后10年内患上癌症，而随访15年的学龄前这一人口比例增加到84%。相对于之下，占外科1改型癌症一半以上的改型1改型癌症的出院机制还并未赢取充分的研究成果。

越来越多的人开始用作分阶段系统来并不一定1改型癌症的困难重重：个棒状在显露现多种胰脏自身抗棒状时转至第1阶段性，显露现血糖反常时转至第2阶段性，显露现疼痛时转至第3阶段性。一些多发胰脏自身抗棒状白血病的个棒状，在1期和2期，困难重重较很慢，并发展为出院的1改型癌症。我们之前详细描述了一组成员在首次样品到多种胰脏自身抗棒状取样后有数10年无癌症的极很慢困难重重者，这组成员病患者数目少，但特征十分明确。随后，我们发现胰脏自身抗原免疫CD8+T细胞内质弟化在困难重重快速的病患者里面基本不存在，但在近期出院和长期存在的癌症病患者里面很容易样品到。这意味著表明，与困难重重病患者相对于，这些病患者自身免疫质弟化的恒定减慢。

早期研究成果表明，尽管恒定性T细胞内(Treg)数量正常，但癌症病患者存在一些机能缺陷，其里面除此以外对IL-2的质弟化能力增加。此外，癌症病患者里面的波动CD4+T细胞内意味著对恒定越来越具抵抗性，显显露为波动T细胞内的可抑制减弱，自然产生的Treg和排泄产生的诱导Treg，以及抗原境遇的CD4+T细胞内里面IL-2质弟化减弱。本研究成果的目的是详细描述了CD4+恒定性T细胞内(Treg)在群集极快速困难重重者里面的特征，他们的为数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法有：BOX研究成果是一项以人群为基础的纵向研究成果，在21岁一般而言出院的病患者亲属里面检查1改型癌症的有意味著因素。我们之前详细描述了长期快速困难重重者的特征，他们保持多重胰脏自身抗棒状白血病将近10年，但并未显露现癌症的外科疼痛，很慢性或非透过性自身免疫。随后，10名之前保持无癌症并情愿获取大量血液取样的快速困难重重者纳入T和B细胞内机能归纳。在现有的研究成果里面，8名很慢困难重重者(SP组成员)，里面位年岁43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的胰脏自身抗棒状白血病。所有的参与者都处于1改型癌症困难重重的1期，尽管一些人随后得不到了胰脏自身抗棒状对某些抗原的白血病质弟化，然而，一名病患者已经处于2期有数6年，但并未显露现外科疼痛，一名病患者被病人为癌症，该受试者72岁，在捕获实验取样时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳里面对该供棒状透过了除此以外分析。分离外周血单个核细胞内(PBMCs)，引入多数值流式细胞内绝技和T细胞内可抑制试验车分析供棒状里面Treg的振幅、表改型和机能。用作FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究、并不一定和回归)透过无监理聚类归纳，分析Treg表改型。

结果：与生来时品质供棒状相对于，来自很慢困难重重棒状的思绪CD4+T细胞内的监理聚类推断，转录的思绪CD4+ Treg振幅增加，与抑制作用诱导的TNFR相关复合物(GITR)解读增加有关。一名HbA1c下降时的病患者与困难重重快速者和匹配的小鼠成员相对于，Treg谱有所相同。机能归纳表明，与生来时品质供棒状相对于，来自快速困难重重棒状的Treg介导的CD4+波动T细胞内可抑制明显损害。显显露为对波动CD4+T细胞内CD25和CD134解读的可抑制增加。

所示1 深入的表改型归纳推断，CD4+Treg亚改型在很慢困难重重链表里面增加。由FlowSOM降解的Treg室，汇聚在来自所有供棒状的来时CD4+CD45RA -细胞内上。根据标明物解读深入研究显露10个元簇:思绪T细胞内_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞内;HLA-DR + GITR +思绪T细胞内;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)用作9个相同Treg标明降解的10个元簇的MST。每个路由器代表一个集群(100个集群)，越来越大的元集群(10个元集群)在路由器组成员周围剪裁。每个路由器里面的饼所示对此单个标明的解读级别。(b)每个元聚类的热所示，以推断整棒状标明解读。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)降解所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的基岩。(e-l)相较丰度为每个metacluster装入终点站所示(丰度> 0.05%)相符为HD和SP组成员:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞内(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞内(l)。黄色橘色代表捐助者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查和。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 用作CITRUS的预测模改型确认，Treg振幅的增加是困难重重快速的标志。分级门控(a - f)和柑桔归纳(g-k)十分SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群棒状的标志性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读透过分离，模拟器FlowSOM群棒状。(b) HD(黑点)和SP(白斑)组成员以及供棒状SP 606(黄色)里面CD25+ cd127的振幅汇总所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控弟集的装入终点站所示;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)龙眼簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读气压所示例，斜线突显露的簇被识别为SP和HD链表彼此之间的相同。(j)装入终点站所示推断了在SP(白斑)和HD(灰点)组成员里面，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相较丰度(人口比例)。(k)直方所示推断每个簇的表改型(粉红色)和Treg标明相较解读与或多或少解读(橙色);上列，文件系统Treg_3;后面一行，文件系统Treg_4。或多或少与所有其他簇里面标明的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查和

所示3 与生来时品质献血者相对于，困难重重快速者思绪treg的GITR增加。每个思绪CD4+T细胞内元簇(思绪T细胞内_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞内;HLA-DR + GITR +思绪T细胞内;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个解读标明的变动。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的解读热所示(sp606不除此以外在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇里面所有HD(粉红色)、所有SP(橙色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR解读串联，推断直方所示(c)和汇总所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和检查和，p< 0.07(黄色)所有供棒状除此以外，p< 0.05(橙色)供棒状SP 606和匹配的HD不除此以外在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR解读，从分级门控，从所有HD(粉红色)、所有SP(橙色)和SP 606(黄色)串联，推断直方所示(e)和汇总所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检查和

所示4 来自快速困难重重的CD4+ treg细胞内支配波动CD4+T细胞内的能力增加。SP组成员用橙色的终点站和橘色对此，HD组成员用黑色的终点站和橘色对此，黄色的终点站/橘色对此供棒状sp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内透过分选。CD4+CD25−(；也者)被标明为CFSE, Treg按注意到的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠凋亡细胞内，指导3天后透过流式细胞内绝技样品。(a-d)与CD4+；也者相较应当的treg指导(自棒状)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者指导。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE可抑制倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制倍数。用作白血病对照(转录的组成员织起来细胞内不含treg)测算可抑制倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重十分测试

所示5 波动CD4+T细胞内对快速困难重重的T细胞内凋亡的可抑制越来越敏感。SP组成员用橙色的终点站和橘色对此，HD组成员用黑色的终点站和橘色对此，黄色的终点站/橘色对此供棒状sp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内透过分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标明，treg按注意到的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠凋亡细胞内，指导3天后透过流式细胞内绝技(CD25反染)和细胞内因弟归纳。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同指导。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE可抑制调升(b)。(c,d) CD25可抑制调升(c)和CD134可抑制调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导里面的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重十分测试

推论：我们结论的推论是，来自快速困难重重弟的凋亡思绪CD4+Treg在GITR解读里面赢取了扩展和珍贵，合理化了进一步研究成果Treg在1改型癌症风险个棒状里面的表征的实质。

原文引自：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28