Diabetologia：激活但功能损坏的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出来口内自身病原体到显现出来1改进型癌症针灸副作用的重大突破亲率在儿童时期就有很好的揭示，多个口内自身病原体乙型肝炎的儿童中的有70%在小鼠切换后10月内身患癌症，而随访15年的儿童这一需求量缩减到84%。比起来说之下，占针灸1改进型癌症一半以上的改进型1改进型癌症的患病机制还不能得到充分的研究课题。

愈发多的人开始运用于分期系统来界定1改进型癌症的重大突破：生物体在显现出来多种口内自身病原体时进入第1先决条件，显现出来体温异常时进入第2先决条件，显现出来副作用时进入第3先决条件。一些多发口内自身病原体乙型肝炎的生物体，在1期和2期，重大突破极快，并发展为患病的1改进型癌症。我们之前揭示了一组成员在首次测定到多种口内自身病原体样本后至较少10年无癌症的极慢重大突破者，这组成员病患人数较少，但相似性非常说明。随后，我们发现口内自身抗体特异性CD8+T终点站粒体反其所在重大突破比较慢的病患中的基本不存在，但在近期患病和起因于的癌症病患中的很不易测定到。这意味著声称，与重大突破病患比起来说，这些病患自身免疫反其所的恒定增强。

早期研究课题声称，尽管恒定性T终点站粒体(Treg)需求量正常，但癌症病患存在一些功用缺点，其中的包括对IL-2的反其所能力减少。此外，癌症病患中的的effectCD4+T终点站粒体意味著对恒定更为具抵抗性，表现为effectT终点站粒体的选择性逼近，自然产生的Treg和活体产生的诱导Treg，以及抗体经历的CD4+T终点站粒体中的IL-2反其所逼近。本研究课题的目的是揭示了CD4+恒定性T终点站粒体(Treg)在一小群极比较慢重大突破者中的的相似性，他们的总数为43岁(31-72岁)，随访小时为18-32年。

法则：BOX研究课题是一项以人群蓝本的交叉研究课题，在21岁以下确诊的病患家庭成员中的检查1改进型癌症的危险性因素。我们之前揭示了长期比较慢重大突破者的相似性，他们保有多重口内自身病原体乙型肝炎高达10年，但不能显现出来癌症的针灸副作用，慢性或非完成性自身免疫。随后，10名一直保有无癌症并愿意提供大量血液样本的比较慢重大突破者不属于T和B终点站粒体功用分析法则。在目前的研究课题中的，8名慢重大突破者(SP组成员)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁中的间的口内自身病原体乙型肝炎。所有的组织者都所处1改进型癌症重大突破的1期，尽管一些人随后失去了口内自身病原体对某些抗体的乙型肝炎反其所，然而，一名病患已经所处2期至较少6年，但不能显现出来针灸副作用，一名病患被诊断为癌症，该病患72岁，在采集实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析法则中的对该遗传物质完成了单独评估。分离出来外周血单个核终点站粒体(PBMCs)，采行多数值流式终点站粒体忍术和T终点站粒体选择性试验评估遗传物质中的Treg的频带、表改进型和功用。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类核对、总括和回归)完成无行政官员聚类分析法则，评估Treg表改进型。

结果：与卫生遗传物质比起来说，来自慢重大突破体的遗忘CD4+T终点站粒体的行政官员聚类辨识，触发的遗忘CD4+ Treg频带缩减，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)强调缩减有关。一名HbA1c升高的病患与重大突破比较慢者和冗余的对其所组成员比起来说，Treg谱有所不尽相同。功用分析法则声称，与卫生遗传物质比起来说，来自比较慢重大突破体的Treg特异性的CD4+effectT终点站粒体选择性相对来说受到破坏。表现为对effectCD4+T终点站粒体CD25和CD134强调的选择性缩减。

所示1 深入的表改进型分析法则辨识，CD4+Treg亚改进型在慢重大突破函数调用中的缩减。由FlowSOM生成的Treg三楼，聚集在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -终点站粒体上。根据标识物强调核对出10个元簇:遗忘T终点站粒体_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T终点站粒体;HLA-DR + GITR +遗忘T终点站粒体;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)运用于9个不尽相同Treg标识生成的10个元簇的MST。每个键值代表一个空降兵(100个空降兵)，较大的元空降兵(10个元空降兵)在键值组成员外围上色。每个键值中的的饼所示问到单个标识的强调级别。(b)每个元聚类的热所示，以辨识连续性标识强调。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)生成所示，以及FlowSOM定位的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起金属量为每个metacluster筒终点站所示(金属量> 0.05%)确定为HD和SP组成员:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T终点站粒体(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T终点站粒体(l)。红色左上方代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon匹配符号秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 运用于CITRUS的预测模改进型证实，Treg频带的缩减是重大突破比较慢的标志。基准离子通道(a - f)和甜菜分析法则(g-k)比起SP组织者和冗余的HD组织者在CD4+CD45RA−T终点站粒体上的关联。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l人群的代表性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR强调完成分离出来，虚拟FlowSOM人群。(b) HD(黑点)和SP(白斑)组成员以及遗传物质SP 606(红色)中的CD25+ cd127的频带摘要所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离子通道子集的筒终点站所示;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度着色，标记出彩的簇被定位为SP和HD函数调用中的间的不尽相同。(j)筒终点站所示辨识了在SP(白斑)和HD(灰点)组成员中的，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的比起金属量(需求量)。(k)直方所示辨识每个簇的表改进型(粉红色)和Treg标识比起强调与时代背景强调(蓝色);上列，存储器Treg_3;示意图四人，存储器Treg_4。时代背景与所有其他簇中的标识的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon匹配符号秩检验

所示3 与卫生献血者比起来说，重大突破比较慢者遗忘treg的GITR缩减。每个遗忘CD4+T终点站粒体元簇(遗忘T终点站粒体_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T终点站粒体;HLA-DR + GITR +遗忘T终点站粒体;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个强调标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的强调热所示(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中的所有HD(黄褐色)、所有SP(蓝色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR强调串联，辨识直方所示(c)和摘要所示(d)。Wilcoxon匹配符号秩和检验，p< 0.07(红色)所有遗传物质包括，p< 0.05(蓝色)遗传物质SP 606和冗余的HD不包括在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR强调，从基准离子通道，从所有HD(黄褐色)、所有SP(蓝色)和SP 606(红色)串联，辨识直方所示(e)和摘要所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon匹配符号秩检验

所示4 来自比较慢重大突破的CD4+ treg终点站粒体高度集中effectCD4+T终点站粒体的能力减少。SP组成员用蓝色的终点站和左上方问到，HD组成员用粉红色的终点站和左上方问到，红色的终点站/左上方问到遗传物质sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T终点站粒体完成分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标识为CFSE, Treg按判读的需求量滴定。用抗CD3 /28微珠转化终点站粒体，指导3几天后完成流式终点站粒体忍术测定。(a-d)与CD4+需要的话者比起其所的treg指导(complex)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者指导。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE选择性百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性百分比。运用于乙型肝炎对其所(触发的响其所终点站粒体不含treg)计算选择性百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析法则。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

所示5 effectCD4+T终点站粒体对比较慢重大突破的T终点站粒体转化的选择性更为寻常。SP组成员用蓝色的终点站和左上方问到，HD组成员用粉红色的终点站和左上方问到，红色的终点站/左上方问到遗传物质sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T终点站粒体完成分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标识，treg按判读的需求量滴定。用抗CD3 /28微珠转化终点站粒体，指导3几天后完成流式终点站粒体忍术(CD25反染)和终点站粒体因子分析法则。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者合作指导。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE选择性前年(b)。(c,d) CD25选择性前年(c)和CD134选择性前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导中的的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析法则。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

得出结论：我们得出的得出结论是，来自比较慢重大突破子的转化遗忘CD4+Treg在GITR强调中的得到了延展和丰富多彩，强调了进一步研究课题Treg在1改进型癌症风险生物体中的的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28